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蛋白定量,除了A280 ,您還可以用A205!

版權所有,轉載請聯系基因市場部
2019-08-12

大伙兒都知道,采用吸收光法在280nm處可以非常簡單快速的進行已知消光系數的純化蛋白的定量檢測。但是呢,采用該方法的前提是:蛋白中必須含有酪氨酸或色氨酸這樣的芳香族氨基酸,才能通過苯環在280nm處的特征吸收進行蛋白質的定量檢測。

那么問題來了!如果您要檢測的蛋白樣品中無芳香族氨基酸可怎么辦呢?必須要用比色法如Pierce660、BCA、Bradford、Lowry等方法來定量嗎?那您又要做標曲、又要加試劑進行顏色反應,過程好繁瑣啊!


NO! 無需比色法,您只需要選擇NanoDropOne/OneC的A205法就可以對無芳香族氨基酸的蛋白質/多肽進行定量啦!

NanoDrop One/OneC已經把A205蛋白定量法的應用程序內置到軟件內了哦!

A205法原理簡介

蛋白質是由肽鏈組成,而肽鏈內的氨基酸之間是由氨基和羧基脫水縮合形成肽鍵連接的,而肽鍵在深紫外區190nm-220nm處有吸收特性,吸收波峰在205nm處,因此可以通過檢測205nm處的吸收光特性來進行蛋白或者多肽的定量檢測。

NanoDrop One/OneC A205法檢測步驟:

選擇Protein A205圖標→選擇方法31→檢測Blank→檢測樣品→得到結果

(注:沒有芳香族氨基酸的蛋白或者多肽的消光系數通常使用31mL/mg*cm。)

是不是操作很簡單呢!

選擇方法

檢測結果

那么A205的方法檢測的準確性怎么樣呢?我們看一下測試數據吧!

粘菌素(polymyxin)就是這樣一個不含酪氨酸和色氨酸的多肽,我們把粘菌素配制成不同濃度的溶液,然后分別用NanoDrop One的基座模式和Evolution 300分光光度計的比色杯模式進行濃度的檢測。每個濃度梯度的樣品分別在NanoDrop One的基座模式上檢測3次,我們看一下在NanoDrop One上檢測數據的重復性以及數據在兩臺儀器上是否一致?

首先我們可以看到采用NanoDrop One 進行A205多肽檢測時,在檢測的一系列濃度梯度的樣品中,同一個樣品的標準差≤0.04,說明NanoDrop One 進行A205多肽檢測結果的重復性是很好的。

其次,我們將NanoDrop One A205數據和Evolution 300數據進行相關性分析,發現兩組數據之間的線性相關系數R2值為0.99923,也就是說在這兩臺儀器上面檢測的數據是非常一致的。

因此,對于無色氨酸和酪氨酸的蛋白或者多肽,也可以采用簡單易用的A205吸收光法進行定量檢測,結果的重復性和準確性都很優秀哦!

想要了解更多的NanoDrop One/OneC的相關信息,您也可以點擊下方鏈接查看:

超微量分光光度計中的美猴王NanoDrop One——火眼金睛鑒定微量污染物

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